做實(shí)�(yàn)的小伙伴,是不是�(jīng)常被“檢出限”、“定量限�這些概念搞得頭暈眼花?一份數(shù)�(jù)可不可靠,方法的靈敏度是�(guān)�。這篇文章,上海析譜儀器有限公司專�(yè)工程師帶來干貨滿滿的�(shí)操指�;幫你搞定分光光度法中檢出限的測定�
TU-1810紫外可見分光光度�(jì)

1.什么是檢出�
簡單來說,檢出限就是你的儀器和方法能夠“有把握地”檢測出待測物質(zhì)的最低濃��
請注意關(guān)鍵詞:“有把握地”——它不是說儀器指針動(dòng)了一下就算檢�,而是指測出的信號(hào)能明確地區(qū)分于空白溶液的背景噪音,并且有足夠的置信度(通常�99%的置信水平)�
為什么它重要���(jià)方法性能�檢出限是衡量分析方法靈敏度的核心指標(biāo)之一。數(shù)值越低,方法越靈��判斷�(shù)�(jù)可靠性:�(dāng)樣品濃度低于檢出限時(shí),你的檢測結(jié)果應(yīng)�(bào)告為“未檢出”(ND�,而不是一�(gè)具體的數(shù)�,否則會(huì)誤導(dǎo)他人�滿足�(biāo)�(zhǔn)要求�很多行業(yè)�(biāo)�(zhǔn)和論文投稿都要求提供方法的檢出限�
2.三步算出檢出�

國際上最常用、也最�(guī)范的方法� “空白標(biāo)�(zhǔn)偏差法�。別�,公式很簡單,我們一步步��
�1步:�(zhǔn)備空白溶�
這里的“空白”指的是不含待測物質(zhì),但�(jīng)歷了全部�(shí)�(yàn)流程的溶�。比�,你用某種試劑處理樣品,那么空白溶液就應(yīng)該加入等量的試劑,并�(jīng)過同樣的加熱、定容等步驟。關(guān)鍵:空白必須真實(shí)反映整�(gè)分析過程帶來的背景干��
�2步:連續(xù)測定空白信號(hào)
用上海析譜制造的紫外可見分光光度�(jì)TU1810,連續(xù)測定空白溶液的吸光度(OD值或吸光度A)至�10次(建議11-20�,次�(shù)越多�(tǒng)�(jì)�(jié)果越可靠)。記錄下每一次的測量��
操作提示�
� 保持儀器穩(wěn)��
� 每次測量前,都用同一�(gè)空白溶液沖洗比色��
� 記錄�(shù)�(jù)要準(zhǔn)��
�3步:�(jì)算與�(jié)�
�(xiàn)在輪到數(shù)�(xué)�(shí)間了,只需兩�(gè)公式�
1、計(jì)算空白信�(hào)的標(biāo)�(zhǔn)偏差(SD�
把你測到的所有空白信�(hào)值(比如11�(gè)吸光度值)輸入�(jì)算器或Excel,直接使� STDEV.S 函數(shù)�(jì)算標(biāo)�(zhǔn)偏差。我們記這�(gè)�(jié)果為SD?(空白標(biāo)�(zhǔn)偏差)�
2、套用公�,計(jì)算檢出限(LOD�
公式:LOD = 3 × SD? / b
這�(gè)�3”就是統(tǒng)�(jì)�(xué)�99%置信度的系數(shù),意味著信號(hào)�(qiáng)度是空白波動(dòng)范圍�3倍時(shí),我們才敢說“真的測到了”�
注意:上面的LOD是以吸光度(A)為單位�,我們最終需要的是濃度!
3、將檢出限轉(zhuǎn)換為濃度單位
你需要知道方法的靈敏�,也就是�(biāo)�(zhǔn)曲線的斜率(b�。假�(shè)你的�(biāo)�(zhǔn)曲線回歸方程�
A =a + b×C(C是濃度),那么斜率就是b�
最終濃度檢出限(LOD?c?� = 3×SD? / b